Пробирка для анализа крови
Добавка в пробирку EDTA.K2 (пробирка для рутинного анализа крови) — это соль EDTA, а именно этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA, молекулярная масса 292) и ее дикалиевая соль, которая является одним из наиболее широко используемых антикоагулянтов крови в клинической практике. В 1993 году Международный комитет по стандартизации гематологии (ICSH)[1] рекомендовал EDTA.K2 в качестве антикоагулянта для рутинного анализа крови. EDTA — это аминополикарбоновая кислота, которая может эффективно хелатировать ионы кальция (Ca2+) в образцах крови. Хелат удаляет место реакции кальция, блокирует и прекращает эндогенный или экзогенный процесс коагуляции, тем самым предотвращая коагуляцию образца крови. Пробирки для рутинного анализа крови в основном используются для общих клинических анализов крови, таких как анализ клеток крови (подсчет лейкоцитов, подсчет эритроцитов, подсчет тромбоцитов и т. д.), исследование морфологии клеток крови, исследование реологии крови и цитологическое исследование костного мозга. При рутинном клиническом анализе крови образцы крови легко подвергаются влиянию таких факторов, как температура и время хранения, что приводит к отклонениям в результатах анализов, что, в свою очередь, влияет на диагностику и лечение заболеваний. Поэтому контроль факторов, влияющих на предварительный анализ, имеет решающее значение для улучшения качества рутинного анализа крови, а также диагностики и лечения заболеваний.
Стандартные рекомендации
Анализ клеток крови (кровь рутинная) — это общий термин для большой категории элементов анализа крови, которые наиболее широко используются в клинической практике. С популяризацией полностью автоматических анализаторов клеток крови (гематологических анализаторов) анализ клеток крови в настоящее время может определять более 30 показателей, связанных с гемоглобином (Hb) и количеством эритроцитов (RBC), количеством лейкоцитов (WBC) и лейкоцитарной формулой, количеством тромбоцитов (PLT) и количеством ретикулоцитов (RET). Руководящие принципы Международного комитета по стандартизации гематологии (ICSH) по анализу клеток крови [1,2] рекомендуют использовать антикоагулянт ЭДТА при сборе образцов для анализа клеток крови, а кровь с антикоагулянтом ЭДТА.К2 является предпочтительным образцом для автоматического подсчета клеток. Образцы крови следует обрабатывать в течение 4–8 часов после сбора, а специфически меченые тромбоциты, связанные с эритроцитами, следует подсчитывать с помощью флуоресцентного проточного цитометра. Рекомендуется, чтобы образцы венозной крови с антикоагулянтом ЭДТА были измерены в течение 4 часов после забора крови; образцы крови с антикоагулянтом должны быть подготовлены для мазков крови в течение 4 часов после сбора. Слишком долгое время может вызвать морфологические изменения нейтрофилов и моноцитов [3]. Основные технические стандарты для клинического тестирования крови и жидкостей организма (WS/T 806-2022) [4] также указывают, что антикоагулянт ЭДТА следует использовать при сборе образцов для анализа клеток крови, и лаборатории должны разработать соответствующие процедуры для сбора образцов у пациентов с псевдотромбоцитопенией, зависимой от ЭДТА. Клинические образцы для анализа клеток крови должны быть исследованы в течение 8 часов после сбора. Национальные процедуры работы клинических лабораторий [5] рекомендуют, чтобы количество тромбоцитов было проверено в течение 1 часа после сбора образца.
Литературные исследования
Время хранения и температура образцов крови повлияют на результаты теста. Чтобы обеспечить точность результатов теста, образцы крови следует отправлять на тестирование вовремя после сбора. Во многих отечественных и зарубежных литературных исследованиях сообщается, что длительное хранение образцов крови может привести к изменениям в морфологии клеток крови, а время хранения положительно коррелирует с изменениями в морфологии клеток крови и отрицательно коррелирует с точностью результатов клинических лабораторных тестов [6,7,8]. Исследования показали [9], что при комнатной температуре (25 градусов), более чем через 4 часа, гематокрит (MCV) и средняя концентрация корпускулярного гемоглобина (MCHC) будут увеличиваться с увеличением времени хранения образцов крови. Это может быть связано с тем, что клетки крови находятся в гипертоническом состоянии, что приводит к увеличению осмотического давления; после смешивания крови с гипотоническим разбавителем эритроциты будут терять воду, что приведет к увеличению среднего объема эритроцитов (MCV), и по мере увеличения объема эритроцитов средняя концентрация корпускулярного гемоглобина также будет увеличиваться. Хранение крови при комнатной температуре в течение 24 часов оказывает наибольшее влияние на тромбоциты. Тромбоциты нестабильны и легко подвержены влиянию времени хранения и температуры. Возможно, что сами тромбоциты обладают агрегационными характеристиками и образуют более крупные частицы. В чувствительных автоматизированных анализаторах крови можно определить только размер клеток, игнорируя свойства клеток, что приводит к большим различиям в тромбоцитах при разном времени хранения и температуре. Поэтому необходимо обеспечить, чтобы образцы цельной крови, собранные в клинической практике, отправлялись на тестирование своевременно, и тест был завершен в течение 3 часов, насколько это возможно. В то же время следует уделять внимание тому, чтобы избегать контакта с источниками тепла, которые могут повысить температуру образца. В то же время образцы, которые не были отправлены на тестирование вовремя, следует своевременно хранить в среде с температурой 4 градуса и тестировать как можно скорее в течение 24 часов.
Исследование, опубликованное в 2020 году [10], оценило образцы крови при разных температурах хранения. Исследование показало, что после 4 часов хранения при комнатной температуре количество лейкоцитов и концентрация гемоглобина значительно снизились, в то время как эти параметры были относительно стабильны при хранении при 4 градусах в течение 24 часов. Аналогичным образом, согласно рекомендациям Международного комитета по стандартизации в гематологии и последующим обзорам, количество CBC и WBC с автоматическим дифференциальным подсчетом стабильно при 4 градусах в течение как минимум 24 часов и даже до 72 часов, со значительными различиями, которые могут быть связаны с типом автоматического гематологического анализатора [11]. Gunawardena et al. [12] использовали гематологический анализатор Sysmex XS-500i (Sysmax) для измерения и обнаружили, что среди параметров общего анализа крови лейкоциты (WBC), эритроциты (RBC), гемоглобин (Hb), среднее содержание гемоглобина в клетках (MCH), нейтрофилы и лимфоциты были стабильны в течение 48 часов при всех трех температурах (4 градуса, 10 градусов и 23 градуса), за исключением количества тромбоцитов (PLT), которое должно быть выполнено в течение 6 часов после сбора.
Поэтому всем лабораториям, обрабатывающим большое количество гематологических образцов, рекомендуется заранее определить влияние различных параметров теста на время и температуру хранения образцов, а также учитывать влияние условий тестирования прибора, чтобы свести к минимуму ошибки.